Manlio Di Stefano nasce a Palermo nel 1981. Dopo aver conseguito la laurea in ingegneria informatica lavora come consulente nel settore informatico per una società americana. Nel frattempo, opera come volontario per una ONG italiana attiva nella Repubblica Democratica del Congo ed in Guatemala in progetti relativi allo sviluppo sostenibile. Nel 2013 diviene membro del Parlamento italiano e poi capogruppo del Movimento Cinque Stelle nella Commissione Affari Esteri e Comunitari per l’intera legislatura. Dal 2013 al 2018 è membro della delegazione parlamentare italiana al Consiglio d'Europa, dove presiede il Comitato per i Rifugiati, i bambini e i giovani migranti. Dal 2014 al 2019 è stato responsabile nazionale di LEX Parlamento, una delle funzioni della piattaforma web del Movimento Cinque Stelle, Rousseau, per la democrazia digitale. A marzo 2018 viene rieletto membro del Parlamento e il 13 giugno viene nominato Sottosegretario di Stato agli Affari Esteri nel Governo del Presidente del Consiglio Conte. A settembre 2019 viene riconfermato nel suo incarico nel secondo Governo del Presidente del Consiglio Conte. A febbraio 2021 viene nuovamente riconfermato nel suo incarico nel Governo del Presidente del Consiglio Draghi.